糖化血红蛋白的测定

　　1、糖化血红蛋白的生化特性

　　正常人有三种血红蛋白：HbA、HbF、HbA2，而成人红细胞中主要含有HbA。在用层析法分离血红蛋白时，可洗脱出3种含糖成分即：HbA1a、HbA1b、HbA1c，合称为糖化血红蛋白。HbA1c是葡萄糖化血红蛋白，另两种是其他糖形成的糖化红蛋白。糖化血红蛋白由HbA在代谢过程中与葡萄糖结合形成，因而它可准确地反映血中葡萄糖水平。我人测定的系指HbA1c。

　　2、糖化血红蛋白的测定方法

　　（1）高压液相法较为准确，除对糖化血红蛋白测定外还对血红蛋白各组分进行分析。但仪器昂贵难普及。
 
　　（2）目前多采用比色法，其原理是，具有酮胺键的GHb在酸性环境中加热，其已糖化部分脱水生成5－羟甲糖醛（5－HMF），后者可与a－硫代巴比妥酸（TBA）起显色反应。此有色物质在443mm处有吸收峰，可用于GHb定量。操作步骤为：加冷蒸馏水于压积的红细胞中制备溶血液并由甲苯他离红细胞膜碎片；取该溶血液加入草酸混合后置100℃水浴水解；水解液中加入三氯醋酸混和、离心；吸出上清液加入TBA混和保温，用分光光度计在443mm处比色。此法不受其他血红蛋白干扰，无需特殊设备，操作方便，成本低廉。
 
　　（3）层析法是采用阳离子交换树脂装柱，用两种不同缓冲液洗脱HbA和HbA1分光光度计比色后计算HbA1百分比。由于国内分离效果不理想，因而没有比色法普遍。

　　（4）普通电泳法对HbA和HbA1分离效果不理想，而等电聚焦电泳因设备昂贵难以推广。